紫外交聯(lián)儀用于Southern印跡雜交

紫外交聯(lián)儀用于Southern印跡雜交

Southern印跡雜交是進(jìn)行基因組DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補(bǔ)的原則特異性地雜交形成雙鏈。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜或其他固相支持物上，經(jīng)干烤或者紫外交聯(lián)儀的紫外線照射固定，再與相對(duì)應(yīng)結(jié)構(gòu)的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交，用放射自顯影或酶反應(yīng)顯色，從而檢測(cè)特定DNA分子的含量  。

由于核酸分子的高度特異性及檢測(cè)方法的靈敏性，綜合凝膠電泳和核酸內(nèi)切限制酶分析的結(jié)果，便可繪制出DNA分子的限制圖譜。但為了進(jìn)一步構(gòu)建出DNA分子的遺傳圖，或進(jìn)行目的基因序列的測(cè)定以滿足基因克隆的特殊要求，還必須掌握DNA分子中基因編碼區(qū)的大小和位置。有關(guān)這類數(shù)據(jù)資料可應(yīng)用Southern印跡雜交技術(shù)獲得。

Southern印跡雜交技術(shù)包括兩個(gè)主要過程：一是將待測(cè)定核酸分子通過一定的方法轉(zhuǎn)移并結(jié)合到一定的固相支持物（硝酸纖維素膜或尼龍膜）上，即印跡（blotting）；二是固定于膜上的核酸與同位素標(biāo)記的探針在一定的溫度和離子強(qiáng)度下退火，即分子雜交過程。該技術(shù)是1975年英國(guó)愛丁堡大學(xué)的E.M.Southern的，Southern印跡雜交故因此而得名。早期的Southern印跡是將凝膠中的DNA變性后，經(jīng)毛細(xì)管的虹吸作用，轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上。印跡方法如電轉(zhuǎn)法、真空轉(zhuǎn)移法；濾膜發(fā)展了尼龍膜、化學(xué)活化膜（如APT、ABM纖維素膜）等。利用Southern印跡法可進(jìn)行克隆基因的酶切、圖譜分析、基因組中某一基因的定性及定量分析、基因突變分析及限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性分析（RFLP）等。

紫外交聯(lián)儀為什么有人稱為DNA紫外交聯(lián)儀，核酸紫外交聯(lián)儀？

紫外交聯(lián)儀主要用于Northern和Southern印跡雜交實(shí)驗(yàn)中將DNA或RNA從凝膠轉(zhuǎn)移到尼龍膜后固膜。

Northern印跡雜交（Northern blot）。這是一種將RNA從瓊脂糖凝膠中轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上的方法。DNA印跡技術(shù)由Southern于1975年創(chuàng)建，稱為Southern印跡技術(shù)，RNA印跡技術(shù)正好與DNA相對(duì)應(yīng)，故被稱為Northern印跡雜交，與此原理相似的蛋白質(zhì)印跡技術(shù)則被稱為Western blot。

Southern印跡雜交是進(jìn)行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜或其他固相支持物上，經(jīng)干烤或者紫外線照射固定，再與相對(duì)應(yīng)結(jié)構(gòu)的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交，用放射自顯影或酶反應(yīng)顯色，從而檢測(cè)特定DNA分子的含量。

DNA是核酸的一種，核酸包括DNA和RNA。核酸的功效與作用是合成蛋白、維持機(jī)體免疫反應(yīng)和抗氧化，核酸是一種生物大分子，在蛋白質(zhì)的復(fù)制和合成中既儲(chǔ)存和傳遞遺傳信息的作用，能夠維持機(jī)體正常的免疫反應(yīng)，具有一定抗氧化的作用，還能夠促進(jìn)細(xì)胞的分化以及影響生物合成，又能夠促進(jìn)身體營(yíng)養(yǎng)的吸收和利用。

斑點(diǎn)雜交（dot blot）是指將待測(cè)的DNA變性后點(diǎn)加在硝酸纖維素膜（或尼龍膜、NC膜）上，用已標(biāo)記的探針進(jìn)行雜交，洗膜（除去未接合的探針），放射自顯影，判斷是否有雜交及其雜交強(qiáng)度，主要用于基因缺失或拷貝數(shù)改變的檢測(cè)。

狹縫斑點(diǎn)雜交（slot blot）：也是廣義dot blot的一種。圓點(diǎn)的形狀因?yàn)辄c(diǎn)很小后期不利于光密度分析，并且孔不易清洗干凈。從點(diǎn)雜交角度來(lái)說(shuō)，狹縫與斑點(diǎn)印跡沒有區(qū)別，只是終印跡形狀不同。如果覺得自己樣品量不大，擔(dān)心樣品不能填滿狹縫其實(shí)也不是問題，因?yàn)椴惶顫M狹縫也不影響雜交結(jié)果，多是狹縫長(zhǎng)短不整齊，另外，通過稀釋樣品填滿狹縫以后再做雜交，后印跡雜交結(jié)果不受影響。