3415熒光蛋白激發(fā)光源區(qū)分平板上未編輯的和假定的編輯的菌落轉(zhuǎn)化子

近日，中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所在《applied microbiology and biotechnology》期刊發(fā)表文獻(xiàn)，文獻(xiàn)中指出利用LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源進(jìn)行篩選。下面是文獻(xiàn)摘要，文獻(xiàn)全文鏈接在網(wǎng)頁(yè)尾部

CRISPR/Cas9系統(tǒng)是一種強(qiáng)大的基因組編輯工具，目前已在一些絲狀真菌中成功應(yīng)用。但Cas9蛋白對(duì)真菌細(xì)胞存在的潛在毒性在一定程度上限制了該體系的進(jìn)一步推廣和應(yīng)用。AMA1是一種來源于構(gòu)巢曲霉的自我復(fù)制因子，它的衍生載體在沒有抗性選擇的情況下很容易丟失。本研究中，我們利用基于AMA1的Cas9表達(dá)載體在無抗篩選條件下的*丟失的特性，消除了Cas9對(duì)威尼斯鐮刀菌TB01的毒性。同時(shí)，挖掘了兩個(gè)可用的用于CRISPR/Cas9系統(tǒng)sgRNA表達(dá)的內(nèi)源性Pol III啟動(dòng)子(FvU6374和Fv5SrRNA)。與FvU6374(40-50%)相比，F(xiàn)v5SrRNA具有更高的單基因編輯效率(> 85%)，使用Fv5SrRNA同時(shí)編輯兩個(gè)基因的效率超過75%。利用上述建立的基因編輯系統(tǒng)，我們刪除了一個(gè)編碼丁二醇脫氫酶的基因FvBDH，獲得的突變體菌株乙醇產(chǎn)量比野生型提高了52%。本研究開發(fā)的高效CRISPR/Cas9系統(tǒng)為后期通過代謝工程推進(jìn)威尼斯鐮刀菌TB01的發(fā)展奠定了技術(shù)基礎(chǔ)；同時(shí)，未來通過進(jìn)一步的遺傳改造和發(fā)酵工藝優(yōu)化后，獲得的FvBDH基因編輯轉(zhuǎn)化子有望用于菌絲蛋白和乙醇的同步生產(chǎn)。

   通過熒光觀察，初步篩選了GFP基因編輯的變異體。使用手持熒光蛋白激發(fā)光源LUYOR-3415區(qū)分平板上未編輯的（熒光）和假定的編輯的（無熒光）菌落轉(zhuǎn)化子。轉(zhuǎn)化板被放置在一個(gè)黑暗的環(huán)境中。然后，打開激發(fā)波長(zhǎng)分別為450 nm和500 nm的綠色熒光樹脂激發(fā)光源，照亮平板觀察或拍攝菌落轉(zhuǎn)化子

   LUYOR-3415RG便攜式熒光蛋白激發(fā)光源能夠觀察GFP、eGFP、dsred、Mcherry、Tdtomato等綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白的表達(dá)，我公司針對(duì)科研院所免費(fèi)試用，試用滿意付款。我們?cè)诒本⒐枮I、武漢、鄭州、?？谠O(shè)有代理商，如需演示，請(qǐng)和我們當(dāng)?shù)卮砩搪?lián)系。